dania niskowęglowodanowe przepisy

Zestawy ELISA zastosowano do pomiaru mysich KC i MIP-2 w osoczu i BAL (R & D Systems). Histologia i immunohistochemia. Myszy uśmiercono za pomocą ip pentobarbitalu i do tchawicy wprowadzono skrócone angiocath o 20 gauge. Następnie płuca napompowano powietrzem i 4% paraformaldehydem. Tchawicę zligowano, a płuca zanurzono w 4% paraformaldehydzie i zatopiono w parafinie. W wybranych eksperymentach usunięto również wątrobę i prawą nerkę. Skrawki (5 .m) stosowano do rutynowej histologii H & E i do immunohistochemii. MAb Gr-1 zastosowano do immunohistochemii neutrofilów. W przypadku immunohistochemii MHC I mAb, mAb MHC I wstrzyknięto iv do Rag2a / r. myszy, a płuca perfundowano PBS przez prawą komorę i poddano obróbce, jak opisano powyżej. MHC I mAb wykryto w skrawkach parafinowych przy użyciu koziego zestawu do wykrywania anty-mysich HRP (BD Biosciences). Cytometrii przepływowej. Zawiesiny pojedynczych komórek przygotowywano z FcRyya / B i B2m3 / p1 typu dzikiego. szpik kostny myszy. Podwielokrotności 1,5 x 106 komórek wybarwiono anty-MHC1 (3-biotyną (1 .g / ml) w obecności blokującego Ab FcRIIl / IIIa (2,4G2; BD Biosciences. Pharmingen) i anty-Gr-1. PE Ab (RB6-8C5; BD Biosciences. Pharmingen). Wykryto biotynę anty-MHC1 (3 przy użyciu streptawidyny-FITC (BD Biosciences. Pharmingen). Neutrofile były bramkowane przez pozytywność Gr-1 i odpowiednie ustawienia rozproszenia przedniego i bocznego. W produkcji in vitro ROS, szpik kostny był obciążony 10. M aminofenylo fluoresceiną (Invitrogen Corp.). MHC I usieciowano przez dodanie 25 .g anty-MHCJa-biotyny w obecności blokującego AB Fcyllllll, po czym dodano 40 .g streptawidyny (Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.) i inkubację w temperaturze pokojowej. 37 ° C przez 15, 30 i 60 minut. ROS indukowano przez inkubację neutrofili z 400 nM PMA (Sigma-Aldrich) jako kontrolą pozytywną. Pobranie cytometrii przepływowej przeprowadzono za pomocą FACScan (BD Biosciences), a dane analizowano za pomocą oprogramowania FlowJo (wersja 6.4.3, Tree Star Inc.). Statystyka. Wyniki są podawane jako pojedyncze punkty danych i jako średnie. SD. W celu określenia istotności stosowano odpowiednio dwustronny test Studenta, ANOVA i test c2. Wartości P mniejsze lub równe 0,05 zostały określone jako znaczące. Podziękowania Praca ta została wsparta częściowo nagrodą GlaxoSmithKline Pulmonary Fellowship Award (dla MR Looney), przyznaną przez kanadyjskie instytuty badawcze w dziedzinie badań medycznych (do JA Van Ziffle), oraz przez NIH przyznaje AI065495 (CA CA Lowell) oraz HL51854 i HL81027 (do MA Matthay). Przypisy Niestandardowe skróty: ALI, ostre uszkodzenie płuc; ARDS, zespół ostrej niewydolności oddechowej; BAL, płukanie oskrzelowo-pęcherzykowe; Mysz BALB / K, kongeniczna mysz BALB / c; EVPE, ekwiwalenty osocza pozanaczyniowego; MHC I, MHC klasa I; TRALI, ostre uszkodzenie płuc związane z transfuzją. Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów. Informacje referencyjne: J. Clin. Invest.116: 1615. 1623 (2006). doi: 10,1172 / JCI27238.
[podobne: spastyka, świadomy sen techniki, rak kolczystokomórkowy ]