usg kraków podgórze

PAI-1R podawano dożylnie przez wstrzyknięcie do żyły ogonowej dwa razy dziennie od dnia (d1) do d5 w dawce mg / kg masy ciała. Szczury kontrolne otrzymały taką samą objętość PBS. Zwierzęta umieszczono w klatkach metabolicznych w celu 24-godzinnego zbierania moczu od d5 do d6 i uśmiercono przy d6. Protokoły dla zwierząt, badanie 4: Wpływ PAI-1R na normalne szczury. Sześć szczurów przydzielono do normalnej grupy kontrolnej lub do normalnej grupy kontrolnej, której wstrzyknięto PAI-1R. Dawkowanie i poświęcenie były takie, jak w badaniu 3 powyżej. Materiały. O ile nie wskazano inaczej, materiały, chemikalia i pożywki hodowlane zakupiono od Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, USA). PAI-1R został wcześniej opisany (44) i został oczyszczony zgodnie z opisem (45). Zwierząt. Badania przeprowadzono na samcach szczurów Sprague Dawley (160. 180 g) uzyskanych z Charles River (Portage, Michigan, USA). Obudowa i opieka nad zwierzętami były zgodne z Przewodnikiem NIH w zakresie opieki i użytkowania zwierząt laboratoryjnych. Zwierzęta karmiono normalną dietą białkową (22% białka, Teklad, numer katalogowy 86 550, Harlan Teklad, Madison, Wisconsin, USA). Indukcja choroby. Zapalenie kłębuszków nerkowych indukowano przez wstrzyknięcie do żyły ogonowej monoklonalnego anty-tyroksy-Ab OX-7 (1,75 mg / kg masy ciała) na d0. MAb OX-7 wytworzono przez hodowane komórki OX-7, jak opisano wcześniej (38). OX-7 wiąże się z epitopem thy-1 na powierzchni komórek mezangialnych i powoduje lizę komórek zależną od dopełniacza, a następnie nieokiełznaną syntezę i depozycję macierzy. Normalnym zwierzętom kontrolnym wstrzyknięto taką samą objętość PBS. Poświęcać się. Zwierzęta znieczulono izofluranem. Po pobraniu krwi z dolnej części aorty brzusznej nerkę perfundowano 30 ml zimnego PBS i zebrano. Do badania histologicznego tkanka korowa została szybko zamrożona i utrwalona w 10% obojętnej buforowanej formalinie. Glomerulę od pojedynczych szczur izolowano przez stopniowe przesiewanie za pomocą sit metalowych 150, 125, 106 i 75 mesh, jak opisano wcześniej (46). Poziomy osoczowe aktywnego szczurzego PAI-1. Aktywny szczur PAI-1 mierzono za pomocą dostępnego w handlu zestawu (Molecular Innovations Inc., Southfield, Michigan, USA). Wydalanie białka w moczu. Szczury trzymano w klatkach metabolicznych na d5, a 24-godzinne wydalanie białka z moczu mierzono metodą Bradforda (Bio-Rad Protein Assay, Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules, California, USA). Mikroskopia świetlna. Wszystkie badania mikroskopowe przeprowadzono w sposób zaślepiony na odcinkach 3. M w tkankach zatopionych w parafinie, barwionych kwasem nadjodowym. Schiff (PAS). Ekspansję macierzy kłębuszkowej oceniono jak opisano wcześniej (47). Pokrótce, w 30 kłębuszkach od każdego szczura, ilość matrycy mezangium zajmującej każdy kłębuszek była oceniana jako 0 (0%), (25%), 2 (50%), 3 (75%) lub 4 (100%). Barwienie immunofluorescencyjne dla Vn, endogennego PAI-1 i PAI-1R. Pośrednią immunofluorescencję przeprowadzono na odcinkach 3 .m kriostatu. Poliklonalne królicze anty-mysie Vn Ab (rozcieńczenie 1: 300, uprzejmie dostarczone przez Emile de Heer, Departament Nefrologii i Patologii, Leiden University Medical Center, Leiden, Holandia) i królicze anty szczurze PAI-1 Ab (400 g / ml rozcieńczenia, American Diagnostica Inc., Greenwich, Connecticut, USA) zostały użyte jako podstawowe Ab. Sprzężone z FITC świńskie anty-królicze IgG (DAKO Corp., Carpinteria, California, USA) zastosowano jako drugorzędowy Ab. Wewnątrzkomórkowe odkładanie się Vn i endogennego PAI-1 w tkance do badania przebiegu w czasie było półilościane przez zsumowanie 20 losowo wybranych kłębuszków na odcinek w skali 0. 4, jak opisano powyżej. W celu podwójnego barwienia immunologicznego zastosowano królicze anty-mysie Vn Ab (1: 300) i koziego antyludzkiego PAI-1 Ab (1: 100; American Diagnostica Inc.) w tym samym czasie i utrzymywano w temperaturze 4 ° C przez noc. Sprzężone z TRITC małpie anty-królicze IgG i skoniugowane z FITC małpie anty-kozie IgG (każde w rozcieńczeniu 1: 200; Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc., West Grove, Pensylwania, USA) zastosowano jako drugorzędowe Ab. S w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. godziny
[hasła pokrewne: olx szprotawa, skleroterapia cena, fenfluramina ]