gorączka latem u dziecka

Przeprowadzono trzy bloty na sondę. Filmy autoradiograficzne skanowano za pomocą densytometru laserowego (Ultrascan XL, Pharmacia LKB Biotechnology Inc., Pleasant Hill, Kalifornia, USA). Dla ilościowych pomiarów densytometrycznych Northern blot, wszystkie sygnały znormalizowano do poziomów GAPDH stosowanych do równego obciążenia. Aktywność plazminy izolowanych kłębków nerkowych. Szczury normalne i d3 nefrityczne uśmiercono 10 minut po iniekcji PAI-1R (n = 4) lub PBS (n = 4). Nienaruszone kłębuszki od poszczególnych szczurów wyizolowano jak opisano powyżej. Całkowitą aktywność glutarnej plazmininy zmierzono przy użyciu substratu chromogennego specyficznego dla plazmin, Chromozym PL (Roche Molecular Biochemicals, Indianapolis, Indiana, USA). Substancja ta jest specyficznie cięta przez plazminę w resztkowy peptyd i 4-nitroanilinę, którą można wykryć spektrofotometrycznie. Nienaruszone kłębuszki zawieszono w 2 x 104 kłębuszków na ml 50 mM Tris (pH 8,2) z 0,1% Triton X-100 i poddano działaniu ultradźwięków przez 15 sekund na lodzie. Po odwirowaniu przy 200 g przez 10 minut w temperaturze 4 ° C dodano na każdą studzienkę 80 .l kłębuszkowego supernatantu i 20 .l 3 mM Chromozym PL i 0,2 .M plazminogenu (DiaPharma Group Inc., West Chester, Ohio, USA). . Absorbancję mierzono przy 405 nm trzy razy w odstępie 2 godzin. Obliczono wzrost absorbancji odpowiadający aktywności plazminy. Standardowa krzywa liniowa została wygenerowana przy seryjnych rozcieńczeniach plazminy świńskiej. Wyniki wyrażono jako kłębuszki U / 108. Statystyka i obliczanie procentowej redukcji nasilenia choroby. Dane są wyrażone jako średnie. SEM. Istotność różnic w zmierzonych wartościach między grupami analizowano za pomocą testu t Studenta lub testu Welcha. P <0,05 uznano za statystycznie istotny. Wywołany przez chorobę wzrost zmiennej zdefiniowano jako wartość średnią dla grupy kontrolnej choroby minus średnia wartość normalnej grupy kontrolnej. Procentowa redukcja nasilenia choroby w grupie leczonej PAI-1R została obliczona w następujący sposób: [1. (Grupa traktowana PAI-1R3 średnia. Normalna grupa kontrolna średnia) / (grupa kontrolna choroby średnia. Normalna grupa kontrolna średnia)] x 100. Wyniki Badanie 1: Przebieg w czasie Vn i endogenne barwienie PAI-1 w anty-1-1 zapalenie nerek PAI-1 wiąże się z Vn zarówno w osoczu, jak i ECM. Aby określić, kiedy Vn i endogenny PAI-1 będą obecne w kłębuszkach z nefrytowych szczurów, przeprowadziliśmy badanie przebiegu w czasie. Wyniki przedstawiono na fig. 1. Barwienie Vn w kłębuszkach wzrasta dramatycznie już po 3 godzinach po wstrzyknięciu przeciwciała antytryptobowego i pozostaje podwyższone przez cały czas trwania choroby (Figura 1a). Endogennie wytwarzane odkładanie PAI-1 do kłębuszkowego ECM wzrasta wolniej, wykazując niewielki wzrost przy d1 i osiągając maksimum przy d6 choroby (Figura 1b). Dlatego zdecydowaliśmy się rozpocząć terapię PAI-1R na d1, gdy obecny jest Vn, z którym PAI-1R może wiązać. Figura Przebieg czasowy kłębuszkowego Vn (a) i endogennego barwienia PAI-1 (b) w zapaleniu nerek wywołanym OX-7 (3. Dane pochodzą od trzech szczurów w każdym punkcie czasowym. NC, normalne sterowanie. Badanie 2: Przebieg czasowy zniknięcia PAI-1R z kłębuszków nerkowych Kolokalizacja z Vn. Aby określić, czy wstrzyknięty PAI-1R był obecny w kłębuszku nerkowym, czy wiązał się z Vn i jak długo pozostawał, barwienie oceniano na odcinkach nerki od dwóch szczurów w dziewięciu punktach czasowych po iniekcji PAI-1R (Figura 2). Barwienie Ab było specyficzne dla ludzkiego PAI-1 i nie barwiło PAI-1 szczura. Nie zaobserwowano wybarwienia w normalnej kontroli lub nefrytowej nerce. PAI-1R wykazuje silne zabarwienie kłębuszkowe i rurkowe w 10 minut po wstrzyknięciu. Rurowe wybarwianie zanika po godzinie od wstrzyknięcia, co sugeruje, że po 10 minutach niektóre PAI-1R są filtrowane, podczas gdy PAI-1R obecny po godzinie prawdopodobnie wiąże się w kłębuszkach nerkowych. [przypisy: rak pluc objawy, świadomy sen techniki, schizofrenia paranoidalna objawy ]